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HPLC纯化

发布时间:2013-10-30 21:07:54  浏览次数:

 HPLC纯化原理
分析HPLC使用柱子和泵系统,可以经受传递高压,这样可以用极细的微粒(3-10μ m)做填料。由此多肽要在几分钟内高度被分析。

HPLC分两类:离子交换和反相。 离子交换HPLC依靠多肽和固相间的直接电荷相互作用。柱子在一定PH范围带有特定电荷衍变成一种离子体,而多肽或多肽混合物,由其氨基酸组成表现出相反电荷。 分离是一种电荷相互作用,通过可变PH, 离子强度, 或两者洗脱出多肽,通常, 先用低离子强度的溶液,以后逐渐加强或一步一步加强,直到多肽火柱中洗脱出。离子交换分离的一个例子使用强阳离子交换柱。如sulfoethylaspartimide通过酸性PH中带正电来分离。

反相HPLC条件与正常层析正相反。多肽通过疏水作用连到柱上,用降低离子强度洗脱, 如增加洗脱剂的疏水性。通常柱子由共价吸附到硅上的碳氢烷链构成,这种链长度为G4-G8碳原子。 由于洗脱是一种疏水作用。长链柱比短链对小的, 高带电肽好。另一方面大的疏水肽用短链柱洗脱好。 然而,总体实践中, 这两类柱互变无多少显著差别,别类载体由碳水化合物构成, 比如苯基。

典型的操作常由两绶冲剂组成,0.1%TFA-H2O和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2O稀acetonitrile。用线型梯变以每分钟0.5%到1.0%改变的速度混合。常见分析和纯化用柱为4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m). 如果用径向填柱,那么大小是8×100(3-10μ m)和25×250mm(10μ m).。大量各种缓冲剂含许多不同试剂,比如heptafluorobutyric酸,0.1%磷酸, 稀He formic酸(5-6%, pH2-4), 10-100mM NH4HCO3, 醋酸钠/氨,TFA/TEA,磷酸钠或钾,异戊酚。这样许多不同组合可形成缓冲剂,但要注意一点:硅反相柱料不能长时间暴露于高pH,甚至微碱pH, 因为这样会破坏柱子。


服务内容:我们主要提供多肽的纯化服务,纯度范围从粗品到99%纯度,满足客户需求。
客户提供资料:1、如果客户直接提供纯化样品,需告知样品的性质、溶解性及目的多肽的大致纯度等相关信息。
2、我们安排相关技术部门实验纯化,签订保密协议后开始进行多肽纯化实验。 
3、对于多肽纯化后的重量,本公司概不负责。
服务流程:1、如有任何需要,通过电话、邮件、传真或业务人员等多种方式联系我们,我公司客服人员将会与您及时沟通,确认订单。签订定制协议后,支付总价的50%作为预付款。
2、多肽纯化服务特别需要双方的沟通,只有客户与公司的互相协作才能高效、科学、快速的完成纯化工作,得到完美的纯化结果,因此我们的专业技术人员与您一对一沟通。
3、订单进行过程中,随时可以咨询纯化进度。 
4、实验结束,依据所签订的合同,向您发送相应质检报告,您确认验收后发货,同时您支付剩余的50%货款。

 

 

 

 

 

 

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